اختبارات عن الدم وكيفية العمل دروس عن الدم

sonuci_2010 libya-sebha

-------------------------------------------------------------------------
اختبارات الدم المختلفة و كيفية العمل

العد بواسطة المجهر وشريحة العد Haemocytometer

كيفية العمل :

1. يخفف الدم 200:1 في محلول التخفيف وذلك بإضافة 20 ميكروليتير دم إلى 4 مل محلول في أنبوبة وازمـــان

( يمكن اخذ العينة بواسطة الماصـــة ذات الانتفاخ والمقسمة

0.5 – 1 – 101 وذلك بسحب الدم حتى 0.5 ثم التكملة حتى 101 بمحلول التخفيف).



1- تقدير نسبه الهيموجلوبين في الدم

أ‌- طريقة جهاز ساهلي : Sahli HAEMOMETER

الطريقه قديمة جداً ونادراً ما تستخدم الان لكن مافي مانع نعرفها


تعتمد هذه الطريقة على مقارنة الألوان وفيها يتحول الهيموجلوبين بواسطة حمض الهيدروكلوريك إلى هيماتين حمضي

ويتكون هذا الجهاز من ثلاثة أنابيب – اثنتان ملونتان والثالثة( التي توجد بالمنتصف )

تستعمل لأجراء الاختبار وهذه مدرجه لكي تعطي قراءة الهيموجلوبين بطريقتين :

اما بالنسبة المئوية (%) أو بالجرام ( جم)

كيفية العمل :

1. يؤخذ دم من الإصبع بواسطة ماصة الهيموجلوبين حتى العلامة (0.02 ملل] ).

2. تمسح الماصة من الخارج حتى لا يعلق بها أي دم زائد.

3. توضع هذه الكمية من الدم في أنبوبة جهاز ساهلي موضوع بها حمض هيدروكلوريك مخفف (1/10 ع يد كل) حتى العلامة 20%.

4. ترج الأنبوبـة جيدا وتترك لمدة 10 دقائق حتى يتحول الهيموجلوبين إلى أحد مشتقاته الملونة.

5. لاحظ اللون بعد ذلك:

لو كان الناتج اغمق من لون الأنابيب الأخرى ضع بواسطة ماصة باستير حمض يد كل المخفف بالتدريج نقطة نقطة حتى يصبح اللون مماثلا في الأنابيب الثلاثة.

6. اكتب قراءة الهيموجلوبين بواسطة التدريجيين الموجودين على الأنبوبة ( جم%) وبالنسبة المئوية.

ملحوظة :

توجد في بعض الوحدات دفاتر تالكوست لتقدير الهيموجلوبين بالنسبة المئوية وهي غير دقيقة يمكن استخدامها عند اجراء مسح صحي خارج المعمل.




ب- تقدير الهيموجلوبين بطريقة الدرابكن : Drabkin Method

تقدر كمية الهيموجلوبين بقياس اللون الناتج عن اتحاده بالسيانيد بجهاز قياس الطيف الضوئي (Spectrophotometer )

ويجب ان يكون لون محلول التخفيف اصفر باهتاً رائقا يعطي درجة امتصاص صفر عند قراءته على

جهاز القياس الطيفي عند طول موجي 540 نانوميتر باستعمال الماء المقطر (Blank)

تنتج الشركات كاشف لتقدير الهيموجلوبين بطريقة السيانيد يتم تخفيفه باتباع إرشادات الشركة المنتجة.

يحفظ محلول التخفيف في زجاجة بنية اللون لعدة شهور في درجة حرارة الغرفة.


كيفية العمل :

1. يوضع 5 مل محلول درا بكين + 20 ميكروليتر (20 ul) دم باستخدام ماصة أوتوماتيكية ( أو ماصة الهيموجلوبين ) .

2. ترج الأنبوبة ثم تترك لمدة 3 – 5 دقائق حتي يتم التفاعل .

3. يقرا على طول موجي 540 نانوميتر بعد ضبط صفر الجهاز باستخدام محلول درابكين .

4. تقرأ عينة قياسية (Standard) على الجهاز الحساب :

درجة امتصاص الاختبار X تركيز المحلول القياسي X معامل التخفيف

درجة امتصاص القياسي 100 = تركيز الهيموجلوبين _ بالجرام / 100 مليلتر ) .

ملحوظة :

هناك بعض الكواشف يمكن قراءة نسبة الهيموجلوبين من جدول مرفق بالكاشف أو بعملية حسابية بسيطة وذلك في حالة عدم وجود المحلول القياسي.



طريقة أعداد منحني قياسي وجدول قياسي :

تعمل تخفيفات متتالية من المحلول القياسي Standard المعروف درجة تركيزه كآلاتي :

2:1 و 3:1 و 4:1 و 5:1

وتقرا هذه التخفيفات بعد ضبط صفر الجهاز بمحلول درابكين.

يرسم منحني بياني تقدير الهيموجلوبين بالجرام / لتر في كل قراءة ومنه يمكن عمل جدول قياسي

لكافة القراءات وينصح بقياس المحلول القياسي عند تغيير الكاشف أو اجراء صيانة للجهاز

Figure 1: Comparison of reaction ki-netics of the cyanmethaemoglobin method (****d on Drabkin solution) and the AHD method (on which haemodirect® and haemoquant® are ****d).

Figure 2: Comparison of methods:
the comparative study of haemo-globin levels in patient samples revealed an excellent correlation be-tween results obtained using the AHD method (haemodirect®, haemo-quant®) and results obtained using the cyanmethaemoglobin method


المعدل المرجعي :

الفئة : النسبة بالجرام

الرجال : 13 –18 جم %

السيدات : 11.5 – 16.5 جم %

أطفال (حديث الولادة) : 16.5 – 19.5 جم %

أطفال (ثلاثة شهور) : 9.5 – 13.5 جم %

أطفال السنة الأولى : 1.05 – 13.5 جم %

أطفال 3 – 6 سنوات : 12 –14 جم %

أطفال 10 – 12 سنة : 11.5 - 14.5 جم %

سيدات حوامل لا يقل عن 11 جم %



2- العد الكلي لكرات الدم الحمراء R.B.Cs Counting


العد بواسطة المجهر وشريحة العد Haemocytometer

كيفية العمل :

1. يخفف الدم 200:1 في محلول التخفيف وذلك بإضافة 20 ميكروليتير دم إلى 4 مل محلول في أنبوبة وازمـــان

( يمكن اخذ العينة بواسطة الماصـــة ذات الانتفاخ والمقسمة

0.5 – 1 – 101 وذلك بسحب الدم حتى 0.5 ثم التكملة حتى 101 بمحلول التخفيف).

. ترج الأنبوبة جيداً لمدة دقيقتين على الأقل ( أو الماصة ).

3 . تملا شريحة العد بماصة شعرية أو ماصة باستير بعد وضع غطاء الشريحة.




4. تعد كريات الدم الحمراء بواسطة العدسة الشيئية X 10 أو X40 على أن يدخل في العد

الكريات التي تمس القاع والحدود الشمالية للمربعات الصغيرة في 5 مربعات من المربع الأوسط للشريحة



الكريات التي لونها اسود تعد فقط



L : للكريات البيضاء

E : للكريات الحمراء



طريقة العد :

خمس مربعات من المربع الأوسط في شريحة العد .

وتكون على الشكل التالي :



الحساب :

عدد كريات الدم الحمراء /مم3 = عدد الكريات * 10000



أسباب الزيادة في عدد كريات الدم الحمراء :

نقص الأكسجين – أمراض القلب وامراض تليف الرئتين ووجود بعض أنواع الهيموجلوبين غير الطبيعي.




أ- أخطاء تؤدي إلى زيادة العدد

1 . حجم الدم اكثر من 20 ميكروليتر أو حجم المحلول اقل من الحجم المطلوب.

2. عدم مزج العينة جيداً مع محلول التخفيف.

3. توزيع كريات الدم الحمراء في شريحة العد غير متوازن.

4. ملئ خاطئ لشريحة العد.

5. عد جميع كريات الدم الحمراء الملامسة للخطوط الجانبية.



أسباب نقص كريات الدم الحمراء :

أمراض الدم مثل اللوكيميا وفشل النخاع العظمي .... الخ


ب- أخطاء تؤدي إلى نقص العدد:

1. حجم الدم اقل من 20 ميكروليتر أو حجم المحلول اكثر من الحجم المطلوب.

2. إرجاء العد لمدة طويلة.

3. وجود جلطة صغيرة في العينة.

4. وجود فراغات هوائية أو شوائب.

5. استعمال شريحة غير نظيفة.



المعدل المرجعي :

الفئة النسبة – ملليمتر المكعب

الرجال : 4.5 –6.5 مليون / ملليمتر المكعب

النساء: 3.8 – 5.8مليون / ملليمتر المكعب

أطفال (3 شهور) : 3.2– 4.8 مليون / ملليمتر المكعب

أطفال( 3 – 6 أعوام) : 4.1– 5.5 مليون / ملليمتر المكعب

أطفال (10 – 12 عام) : 4 – 5.4 مليون / ملليمتر المكعب





3- العد الكلي لكريات الدم البيضاء : Total Leucocytic Counting


بواسطة المجهر وشريحة العد Haemocytometer



محلول التخفيف يحلل كريات الدم الحمراء ويصبغ انويه كريات الدم البيضاء بلون بنفسجي فيسهل عدها.

كيفية العمل :

1- يخفف الدم 2:1 باستخدام الماصة ذات الانتفاخ المدرجة

0.5 ، 1 ، 11 بملئها بالدم حتى علامة 0.5 ثم بالمحلول حتى علامة 11.



2- يمكن عمل نفس التخفيف 20 ميكروليتر إلى 0.38 مل من المحلول ( باستعمال الماصة الأوتوماتيكية ) في أنبوبة زجاجية.



3- ترج الأنبوبة جيداً.

4- تملأ شريحة العد بواسطة ماصة باستير بعد وضع غطاء زجاجي للشريحة.



5- تعد كريات الدم البيضاء في المربعات الأربعة الخارجــــية باستخدام العدسة الشيئية ( *10) للمجهر.



الحساب :

عدد كريات الدم البيضاء /مم3 :عدد الكريات * 100/2 = عدد الكريات * 50





الأخطاء التي تؤدي إلى زيادة أو نقص عدد كريات الدم البيضاء :

نفس الأسباب التي تم ذكرها عند عد كريات الدم الحمراء .

لتلافي هذه الأخطاء يمكن عد عينه أخرى أو عدد أكبر من الكريات البيضاء.


أسباب الزيادة في عدد كريات الدم البيضاء:

1 . زيادة فسيولوجية أثناء الحمل والولادة ، عقب مجهود عضلي وفي الأطفــال حديثي الولادة (18000 – 25000/مم3).

2 . زيادة مرضية – العدوي بالميكروبات العنقودية والسبحية مثل التهاب اللوزتين والزائدة الدودية والتهاب حوض الكلي – الدرن.

أمراض الحساسية والجلدية والطفيليات.

العدوي بالفيروسات.

الأورام الخبيثة وسرطان الدم.


أسباب النقص في عدد كريات الدم البيضاء:

العدوى ببعض الفيروسات.

فشل النخاع العظمي.

التيفود والباراتيفود.


المعدل المرجعي :

الفئة النسبة / مم 3

البالغين : 4000 – 11.000 / مم3

أطفال( عام ) : 6000 – 18.000 / مم3

أطفال (4 – 7 أعوام) : 5000 – 15.000 / مم3

أطفال (8 – 12 عام) : 4.500 – 13.500 / مم3

-----------------------------------------------------------------------------
التعداد اليدوي للكريات البيض بعدادة نيوبار


استخدام عدادة نيوبار في التعداد اليدوي للكريات البيضاء

عينة الدم المطلوبة :
دم شعري ماخوذ من الاصبع أو دم وريدي مجموع على مانع التخثر الــ EDTA

محلول التمديد :
يستخدم عادة محلول ناقص التوتر قادر على تخريب الكريات الحمراء وأه هذه المحاليل الممدة هو
محلول( Trukحمض الخل الثلجي 3% ) أو حمض الخل 2% محلول حمض كلور الماء 1%

طريقة العمل المخبري:
1- يمزج انبوب الدم جيدا لمدة دقيقة وبشكل لطيف دون رج
2- يؤخذ بواسطة الممص (الميكرو بيبيت) 500 ميكرون محلول ممدد الى انبوب مخبري نظيف وجاف ثم يؤخذ من انبوب الدم 25 ميكرون دم كامل ويتم الضغط والترك عدة مرات حتى ينظف رأس الممص من آثار الدم
3- يترك لمدة دقيقتين
4- توضع ساترة عدادة نيوبار على العدادة فوق حجرتي التعداد
5- تملأ حجرة العدادة وتترك لتستقر الكريات عليها يراقب التجانس في توزع الكريات اذا لم تكن متجانسة في التوزع يعاد العمل بعد تنظيف العدادة
6- اذا كان التوزع متجانسا نبدأ بتعدادها حيث نعد 4 مربعات من مربعات البيض حيث كل مربع يحوي 16 مربع صغير (نعد الكريات الموجودة داخل المربعات أما الخطوط الثلاثية المحيطية فنعد الكريات الموجودة على خطين فقط ونهمل خطين)
7- يستنتج تعداد البيض بالعلاقة
تعداد البيض = عدد البيض ب 4 مربعات X تصحيح التمديدX تصحيح الحجم
تعداد البيض = عدد البيض ب 4 مربعات X 50

8 – نلجأ الى العد في الحجرة التانية من العدادة ونأخذ الوسط الحسابي للتعدادين

أهمية تعداد الكريات البيض
يعد من العلامات المخبرية التي تفيد في تشخيص حالات مرضية مختلفة ويكمل التعداد بالتعداد التفريقي للكريات البيضاء (الصيغة الدموية)
1- ينقص عدد الكريات البيضاء عن الحد الأدنى الطبيعي للعمر في حالات عديدة منها:
الحصبة والحصبة الألمانية والأنفلونزا والحمى التيفية والحمى المالطية والتهاب الكبد الانتاني والذئبة الحمامية والداء الرثواني والسل والتعرض للاشعاعات وتناول بعض الأدوية مثل ( الكلورامفينيكول – مركبات السولفا- أميدوبيرين – المدرات – التيازيد.....الخ)
2- يرتفع عدد الكريات البيض عن الحد الأعلى الطبيعي بالنسبة للعمر في حالات عديدة منها:
التهاب الزائدة الدودية – ذات الرئة – التهاب السحايا – التهب البريتوان – الحمى الرثوية – بعض ابيضاضات الدم – بعد الحروق والرضوض – احتشاء العضلة القلبية – الأورام الخبيثة – انحلالات الدمتعاطي بعض الأدوية مثل الستيروئدات......... الخ